环亚集团·AG88提供的本试剂盒专门用于科学研究,严禁用于医学诊断。本文将对人白介素17(IL-17)ELISA试剂盒的使用说明及检测原理进行详细介绍。
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被adropin(AD)抗体的微孔中,依次添加样本、标准品及HRP标记的检测抗体,并经过温育和彻底洗涤。随后,利用底物TMB进行显色反应,TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,随后在酸的作用下转化为最终的黄色。颜色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关关系。最后,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算出样品的浓度。
样品收集、处理及保存方法
以下是对不同类型样本的收集和处理方法:
- 血清:选择不含热原和内毒素的试管。操作时要避免任何细胞刺激。血液收集后,3000转离心10分钟,小心分离血清与红细胞。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟,取上清。
- 细胞上清液:3000转离心10分钟以去除颗粒及聚合物。
- 组织匀浆:将组织捣碎并加入适量生理盐水,3000转离心10分钟后取上清。
- 保存:如样品未能及时检测,请分装成一次用量并保存在-20℃,避免反复冻融,解冻时在室温下进行,确保样品均匀充分解冻。
自备物品和操作注意事项
本试剂盒的组成及标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200、400 pg/mL。试剂的准备需要对20倍洗涤缓冲液进行稀释,用蒸馏水按1:20的比例稀释,即1份的20倍洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
洗板方法
操作步骤应严格按照说明执行,以确保结果的准确性。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel中,以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线。根据曲线方程计算各样本的浓度值。