环亚集团·AG88提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书旨在为研究人员提供详细的细胞培养指引，以确保细胞在实验中的高效利用。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁与悬浮混合生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，传代后每两天更换培养液。对于悬浮细胞，离心收集后处理，贴壁细胞则按照贴壁细胞处理方法进行操作。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待培养至良好状态，灌满完整培养液并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞时，请先用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后置于超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定其状态，随后再进行后续处理。

显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞图像（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，需将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，即可进行传代。

对贴壁细胞，传代请参考以下步骤：1）弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次；2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态；3）细胞大部分变圆且脱落后，加入5ml以上完全培养基终止消化；4）轻轻吹打细胞使其完全脱落后转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清后重悬于1-2ml完全培养基。最后，按1:2的比例进行分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞，传代可采用以下方法：方法一：收集细胞，1000 RPM条件下离心8-10分钟，弃上清后补加1-2ml培养液后吹匀，再按1:2比例分瓶；方法二：选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，并按1:2比例分至新瓶。

b. 细胞冻存

细胞生长至培养瓶覆盖80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗；接着，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，当细胞回缩变圆时，加入5ml完全培养液终止消化；轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。弃上清后，沉淀细胞加入1ml 环亚集团·AG88无血清冻存液，混匀后加入冻存管。

将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，必须在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，确保冻存管内无冰晶后，用75%酒精擦拭外壁。将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。弃去上清后，用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中，第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，需将培养液收集于离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。然后重悬处理，并按上述方法进行传代培养。

五、售后条款

若细胞出现问题，依据不同情况可进行重发。例如，细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液漏液等，均可申请重发；细胞污染问题需在收到产品48小时内提供实验结果，核实后重发。同时，细胞的活性和状态需在规定时间内提供照片和实验结果进行判定。

如因客户错误操作或使用非推荐的培养体系导致的问题，或在规定时限内未通知我方，则不予重发。具体情况将由技术人员进行评估处理。

通过环亚集团·AG88的细胞培养方案，您将能更高效地进行生命科学研究。若有其他问题或需要进一步支持，请随时联系我们！